qPCR的全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，也叫实时定量基因扩增荧光检测系统，简称qPCR。基因表达分析是生物学研究的重要领域，而定量PCR（qPCR）则是其关键技术之一。qPCR技术通过靶向特定基因序列，实现对基因表达水平的精确测量。

为了获得准确可靠的实验结果，需要对qPCR实验过程中的各个参数进行深入理解。一般来说，在qPCR数据分析中，判断数据是否可靠主要依据以下几个方面：

1.扩增曲线

扩增曲线（Amplification curve）：在反应进行过程中，以循环数为横坐标，以反应过程中实时荧光强度为纵坐标，生成扩增曲线。

理论上PCR过程中反应产物是以指数增长的，但随着PCR循环数的增加，DNA聚合酶失活、dNTP和引物枯竭、反应副产物阻碍反应等原因，致使PCR的扩增效率降低，产物生成的速度逐渐减缓，因此扩增曲线是一条“S形”曲线。

扩增曲线可以分成四个时期：基线期，指数期，线性期，平台期。

理想的扩增曲线应该呈现出典型的 S 型曲线，起始时没有扩增，起峰时间正常，并能达到平台期。且曲线应该平滑，没有明显的锯齿状。

2.Ct值是否在合理范围

Ct值是PCR过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时的扩增循环次数。

Ct值是判断实验成功与否的重要参考，所以应该在合理的范围内，一般来说，CT值应该在 15-35 之间，且复孔间的曲线重复性好。

一般内参基因14-22之间，并且样品间内参的Ct值差不超过1，表明内参基因表达量稳定。

目的基因Ct值一般是大于内参基因Ct值，一般14-35之间。如果目的基因Ct值超过了35，可能会影响最后实验结果的判断。所以，如果遇到Ct值偏大，最好再重复一次。

3.熔解曲线

不管Ct值多好，如果熔解曲线不对，就要重来。

什么是熔解曲线呢？熔解曲线是指随温度升高DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。熔解曲线分析可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。

熔解曲线上有特征峰（Tm，DNA双链解链50%的温度），一般通过熔解曲线判断扩增产物是否单一:

1）TM在75-90之间；

2）单峰无杂峰；

主峰前有杂峰：可提高退货嗯度、降低引物浓度、重新设计引物

主峰后有杂峰：调整稀释倍数、减少引物

3）峰距在5个TM内最好。