实验室环境和人体表面微生物的检测
一、实验目的
- 1.证明实验室环境与体表存在微生物。
- 观察不同类群微生物的菌落形态特征。
- 体会无菌操作的重要性。
二、实验原理
通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养1～2d内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。
三、实验材料
- 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂平板
- 试剂：无菌水
- 仪器与其他：无菌试管、灭菌棉签（装在试管内）、接种环、试管架、酒精灯、记号笔、标签纸、废物缸等。
四、实验步骤
1．实验室细菌检查
（1）空气
将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一牛肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。1 h后盖上两个皿盖。
（2）实验台和门的旋钮
① 用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。
② 取棉签：左手拿装有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持试管帽，将其取出，将管口很快地通过酒精灯的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。塞回试管帽，并将空试管放在试管架上。
③ 弄湿棉签：左手取灭菌水试管，如上法拨出试管帽并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，塞回试管帽，并将灭菌水试管放在试管架上。
④ 取样：将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2cm2的范围．
⑤ 接种：在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝．再将棉签伸人，在琼脂表面顶端接种，即滚动一下，立即闭合皿盖。将原放棉签的空试管拨出试管帽，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。
⑥ 划线：另取接种环在火焰上灭菌，进行划线，整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。
2．人体细菌的检查
（1）手指（洗手前与洗手后）
① 分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后。
② 移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板的表面，轻轻地来回划线，盖上皿盖。
③ 用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖。
（2）头发
在揭开皿盖的琼脂平板的上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落到玻脂平板表面，然后盖上皿盖。
（3）咳嗽
将去皿盖的琼脂平板放在离口约6～8cm处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖。
（4）鼻腔
① 取棉签：左手拿装有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持试管帽，将其取出，将管口很快地通过酒精灯的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。塞回试管帽，并将空试管放在试管架上。
② 弄湿棉签：左手取灭菌水试管，如上法拨出试管帽并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，塞回试管帽，并将灭菌水试管放在试管架上。
③ 用湿棉签在鼻腔内滚动数次
④ 接种：在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝．再将棉签伸人，在琼脂表面顶端接种，即滚动一下，立即闭合皿盖。将原放棉签的空试管拨出试管帽，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。
⑤ 划线：另取接种环在火焰上灭菌，进行划线，整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。
3．做好标记后，将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，放37℃培养箱，培养1～2d。
五、实验结果
- 菌落描述
| 样品来源 | 菌落数
（近似值） |
菌落类型 | 特征描写 | ||||||
| 大小 | 形态 | 干湿 | 高度 | 透明度 | 颜色 | 边缘 | |||
- 2.比较
| 样品来源 | 菌落数（1/4平板） | 菌落类型数（近似值） |
六、注意事项
- 接种环与琼脂表面的角度要小，移动的压力不能太大，否则会刺破琼脂。
- 整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。
- 3. 未知菌落勿直接嗅闻或触碰，操作后需消毒台面并洗手。
七、思考题
- 1.比较各种来源的样品，哪一种样品的平板菌落数与菌落类型最多？
- 2.人多的实验室与无菌室(或无人走动的实验室)相比，平板上的菌落数与菌落类型有什么区别？你能解释一下造成这种区别的原因吗？
- 3.洗手前后的手指平板，菌落数有无区别？
- 4.通过本次实验，在防止培养物的污染与防止细菌的扩散方面，你学到些什么？有什么体会