在分子生物学实验室，试剂配制是科研工作的第一步，也是决定实验成败的关键环节。无论是提取DNA时的PBS缓冲液，还是SDS-PAGE凝胶中的Tris-HCl，每一种试剂的浓度、pH值甚至灭菌方式，都可能直接影响实验结果。本文整理了实验室最常用的10类试剂及缓冲液的配制方法，涵盖核酸提取、蛋白质研究、细胞培养等核心场景。

一、基础溶液：实验操作的”基石”

1. 去离子水（ddH₂O）

用途：所有试剂配制的基础溶剂，避免杂质干扰
制备方法：

• 自来水经石英砂过滤→活性炭吸附→离子交换柱（去除阴阳离子）→0.22μm滤膜过滤
• 电导率需≤18.2MΩ·cm（25℃），4℃保存不超过2周
  注意：标记”用于分子生物学实验”和”用于常规实验”，避免交叉污染

2. 10%（W/V）SDS溶液

用途：蛋白质变性剂（如SDS-PAGE、Western blot）、细胞裂解液成分
配制步骤：

1. 称取10g SDS（十二烷基硫酸钠）置于200mL烧杯中，加入80mL去离子水
2. 68℃水浴加热搅拌至完全溶解（溶液透明，无颗粒）
3. 滴加浓盐酸调节pH至2（约需0.5mL），加去离子水定容至100mL
4. 室温保存，无需灭菌（SDS本身有抑菌作用）
   ⚠️安全提示：SDS粉末对呼吸道和皮肤有刺激性，需戴口罩和手套操作，称量时避免扬尘
5. 20%（W/V）葡萄糖溶液

用途：细菌培养（如LB培养基添加物）、细胞冻存液成分
配制步骤：

1. 称取20g葡萄糖，加入80mL去离子水搅拌溶解
2. 22μm滤膜过滤除菌（葡萄糖高温易碳化，不可高压灭菌）
3. 分装至10mL离心管，-20℃保存，避免反复冻融
   应用场景：配制LB固体培养基时，待培养基冷却至50℃后加入（终浓度5%），防止葡萄糖焦化

二、核酸实验专用试剂

4. TE缓冲液（10mM Tris-HCl + 1mM EDTA，pH8.0）

用途：DNA保存液（抑制核酸酶活性）、核酸电泳上样缓冲液基础成分
配制步骤：

1. 准备母液：1M Tris-HCl（0）、0.5M EDTA（pH8.0）
2. 取10mL 1M Tris-HCl和2mL 0.5M EDTA，加入800mL去离子水混匀
3. 定容至1L，121℃高压灭菌20分钟，室温保存
   关键原理：EDTA螯合Mg²⁺（核酸酶必需的辅因子），Tris维持弱碱性环境（DNA在0最稳定）
4. TAE缓冲液（50×浓缩液）

用途：琼脂糖凝胶电泳（分离基因组DNA、质粒等大片段核酸）
配制步骤：

1. 称取242g Tris碱、1mL冰乙酸，加入800mL去离子水
2. 加入100mL 0.5M EDTA（0），搅拌至完全溶解
3. 定容至1L，室温保存（无需灭菌，使用时用去离子水稀释50倍）
   使用技巧：电泳槽中TAE缓冲液需没过凝胶1-2mm，每电泳3次需更换新缓冲液（避免离子强度下降，影响分离效果）
4. 3M醋酸钠（pH5.2）

用途：DNA沉淀（与乙醇配合使用）、核酸纯化洗脱液
配制步骤：

1. 称取8g三水合醋酸钠（NaOAc·3H₂O，分子量136.08），加入40mL去离子水
2. 磁力搅拌至溶解，滴加冰乙酸调节pH至2（约需6-8mL，用pH计监测）
3. 定容至100mL，121℃高压灭菌20分钟，室温保存
   沉淀DNA配方：DNA溶液中加入1/10体积3M醋酸钠（2）+2倍体积无水乙醇，-20℃静置30分钟，12000rpm离心10分钟

三、蛋白质实验专用试剂

7. PBS缓冲液（1×，pH7.4）

用途：蛋白质提取、细胞洗涤、Western blot封闭液基础
组份浓度：137mM NaCl，2.7mM KCl，10mM Na₂HPO₄，2mM KH₂PO₄
配制步骤：

1. 称取8g NaCl、2g KCl、1.42g Na₂HPO₄、0.27g KH₂PO₄，加入800mL去离子水
2. 磁力搅拌至完全溶解，用浓盐酸调节pH至4（约需1-2mL）
3. 定容至1L，121℃高压灭菌20分钟，4℃保存
   变体配方：如需含钙镁离子，可添加1mM CaCl₂和5mM MgCl₂（用于细胞培养）
4. 1.5M Tris-HCl（pH8.8）

用途：SDS-PAGE分离胶配制
配制步骤：

1. 称取7g Tris碱（分子量121.14），加入800mL去离子水搅拌溶解
2. 用浓盐酸调节pH至8（约需55mL，必须冷却至室温后再定容pH，温度每升高1℃，Tris pH降低0.03个单位）
3. 定容至1L，室温保存（无需灭菌，凝胶配制时需加APS和TEMED，现配现用）
   原理：分离胶8与浓缩胶pH6.8形成pH梯度，使蛋白质在浓缩胶中压缩成条带，提高分离分辨率
4. 5×SDS-PAGE上样缓冲液

用途：蛋白质样品变性与显色（含指示剂，追踪电泳进度）
组份：250mM Tris-HCl（pH6.8），10% SDS，50%甘油，0.5%溴酚蓝，5% β-巯基乙醇
配制步骤：

1. 取5mL 1M Tris-HCl（8）、2g SDS、5mL甘油、0.1g溴酚蓝，加入去离子水至8mL
2. 加入1mL β-巯基乙醇（还原剂，打开二硫键），定容至10mL
3. 分装至5mL离心管，-20℃保存，使用前95℃加热5分钟使蛋白质变性

四、细胞培养专用试剂

10. 0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液

用途：贴壁细胞消化（分解细胞间蛋白质，使细胞脱落）
配制步骤：

1. 称取25g胰蛋白酶（Sigma T4049）、0.02g EDTA·2Na，溶于100mL PBS缓冲液（pH7.4）
2. 磁力搅拌30分钟至完全溶解，22μm滤膜过滤除菌
3. 分装至10mL离心管，-20℃保存，使用前37℃水浴融化
   注意：胰蛋白酶活性受pH影响大，需严格控制2-7.4，4℃保存不超过2周