简介

细胞划痕法(wound healing）是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型。用于探讨某个基因或某种药物对细胞迁移能力的影响。

实验准备：

材料：细胞样品

试剂：无血清培养基、PBS

仪器，耗材：6 孔板、marker 笔、直尺、枪头、超净工作台、倒置显微镜

实验步骤：

1.划线：于六孔板底面，马克笔顺直尺画三条横线作为标记线。

2.种板：根据分组种板，细胞密度为5×105个/孔左右。并务必铺匀。

3.划痕：待细胞长满后，用直尺比着，200ul枪头垂直于孔板和画的标记线划两条垂线，使划痕与标记线相交，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点。

4.清洗：弃去旧培养基，用PBS轻轻润洗两到三次，直到划下来的细胞冲洗干净。

5.加液：根据分组分别加入加药培养基或无血清培养基。

6.拍照观察：划痕、清洗、加液完成后，用显微镜拍不同倍数的照片，作为0h对照。放入37℃，5%CO2培养箱中培养。在所需时间点取出细胞，于显微镜下观察同一位置划痕宽度并拍照。

7.数据分析：一种是统计细胞迁移的距离，一种是统计划痕面积。都可以用ImageJ软件来进行分析。

注意事项和经验分享

1.直尺和马克笔等工具用前务必照紫外消杀。

2.种板所用细胞数目可根据细胞的生长快慢调整接种数量。保证每组细胞铺板密度一致，保证每孔务必铺匀。

3.提前用马克笔画好线，避免细胞种板后不好操作。枪头画线之前，不要弃去原培养基，否则划下来的细胞团块会堆积在划痕边缘上堆积导致宽度不统一。

4. 铺细胞最好使用 6 孔板，因为 6 孔板可以保证有相当距离的平直划痕，而且因为有 5 条定位线，与划痕相交，这样就有10 个可固定监测点，不作重复，误差也很小。
5. 如果你连续监测 24 小时，你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果，而不是单纯的细胞迁移。

如果要单纯的考虑细胞迁移，可以先用丝裂霉素（1 ug/ml）处理一小时，抑制细胞的分裂，这样结果就是细胞迁移的作用了。另外，使用无血清培养基也可以降低增殖对实验结果的影响。
6. 照片拍完之后，可以用 ImageJ 来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。
7. 应尽量清洗掉散落的细胞，对于一些细胞，低血清浓度下也能重新贴壁并增殖，此外也影响数据美观。