- 细胞铺板技巧：铺板时应将细胞悬液在培养皿上方竖直悬空均匀、缓慢地滴加，然后采用 “8” 字法或 “十字” 形轻轻摇晃培养皿，确保细胞均匀分布。对于 96 孔板，枪头与孔壁呈 45℃沿壁缓慢并均匀地将细胞悬液分配到每个孔中，每铺一部分及时混匀细胞悬液。
- 培养基预热：将完全培养基、PBS、胰酶等置于 37℃预热至室温，可减少细胞冷应激，有利于细胞状态的保持。
- 细胞消化控制：消化细胞时要随时观察细胞状态，消化时间太短细胞难以脱落，太长则会影响细胞活性。当细胞皱缩且间隙变大、可从皿底滑落且不聚团成块时，应及时加培养基终止消化。
- 细胞计数准确性：进行细胞计数时，吹打细胞要轻柔且充分，确保细胞完全分散成单个细胞。计数前可将细胞悬液与台盼蓝混匀，以区分活细胞和死细胞，提高计数的准确性。
- CCK-8 法优于 MTT 法：CCK-8 使用更方便，无需洗涤细胞，能快速检测，线性范围广，灵敏度高，重复性好，对细胞毒性小，产生的甲臜是水溶性的，可省去溶解步骤，减少误差。
- 原代细胞分离方法选择：组织块法操作简便、细胞损伤小、存活率高，但获取效率低、污染风险高、异质性大，适用于对酶消化敏感的组织；酶消化法高效快速、细胞纯度高、可控性强，但细胞有损伤风险，操作复杂，适用于对酶耐受的细胞类型。
- 原代细胞培养基选择：不同原代细胞对培养基成分需求不同，应根据细胞类型选择特定的基础培养基，并添加相应的生长因子、血清等补充物。例如，内皮细胞需要添加特定生长因子，神经细胞需添加 B27 等。
- 细胞冻存与复苏：冻存细胞时，若冻存前细胞状态好，冻存操作无误且试剂新鲜，细胞在 – 80℃冰箱可保存半年左右，长期保存需转入液氮。复苏细胞时要快速解冻，减少细胞损伤。
- 防止细胞污染：全程严格遵守无菌操作规范，所用器材高压灭菌，试剂若不是无菌的需用 22μm 水系或有机系过滤器灭菌，可在培养基中加入 1% 的双抗防止污染。
- 流式细胞术样本处理：避免固定时间过长，重悬细胞时不要用旋涡震荡，可用吸头吹吸且注意不要吹起气泡，控制好胰蛋白酶消化的浓度和时间，传代后次日细胞换液前先用缓冲液漂洗两次以去除未贴壁的细胞及碎片。
