实验原理

CCK-8全称Cell Counting Kit-8，是一种基于WST-8的应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测试剂盒。其工作原理为在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8这一物质可以\被线粒体脱氢酶还原成橙黄色的甲瓒产物，且其颜色深浅与细肥增殖程度成正比，与细胞毒性程度成反比。

实验步骤

• 制备细胞悬液:若为悬浮细胞则直接离心收集对数生长期的细胞;若为贴壁细胞则用胰酶消化后离心收集细胞。将收集到的细胞用含血清培养基重悬后，用血细胞计数板计数，再稀释为5X10^3~5X10^4T/ml的单细胞悬液。
• 在96孔板中接种细胞悬液，每孔100ul，同时设计不同的浓度组，每个浓度组可设计3~6个复孔，且设置好空白组和对照组。
• 将培养板放入培养箱中预培养24h左右(37°C, 5% CO₂)。
• 向培养板各孔中加入不同浓度的待测物质(药物、化学试剂等)放入培养箱中孵育6~96h。
• 向每孔中加入10ulCCK-8溶液，加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀(防止因CCK8试剂沾在孔壁上而带来的误差) ,加样的过程中尽量不要产生气泡，以免影响OD值读数。
• 将培养板放入培养箱中孵育1-4h。
• 用酶标仪测定450nm处的吸光度(OD)。

细胞抑制率= (对照-实验) / (对照-空白) X100%

细胞存活率= (实验-空白) / (对照一空白) X100%

▲实验:具有细胞、培养基、CCK-8和药物溶液

▲对照:具有细胞、培养基、CCK-8

▲空白:只有培养基和CCK-8

▲PBS孔:防止液体过度蒸发