实验核心流程

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一、实验前准备

1. 细胞选择与处理

1）使用对数生长期的肿瘤细胞（如Hepa1-6、4T1等），确保细胞活力＞90%。

2）细胞悬液浓度需优化（通常1×10⁶~1×10⁷ cells/mL），过高可能导致坏死，过低则成瘤率低。

3）避免反复冻融细胞，接种前用PBS或无血清培养基重悬。

2. 动物选择

1）品系匹配：免疫缺陷鼠（如裸鼠、NSG）用于人源肿瘤，免疫健全鼠（如C57BL/6、BALB/c）用于鼠源肿瘤。

2）年龄/体重：通常选择6-8周龄小鼠，体重18-22g，确保代谢状态稳定。

3）伦理审查：需通过机构动物伦理委员会（IACUC）审批，遵循“3R原则”。

二、操作流程关键点

1. 接种部位与技巧

1）部位：背部或侧腹皮下（避开脊柱和重要器官），注射前酒精消毒皮肤。

2）方法：

用1mL注射器（25G针头）斜刺入皮下，缓慢注入100-200μL细胞悬液。形成明显“皮丘”为成功标志，若液体漏出需重新操作。

3. 麻醉与镇痛

1）短暂异氟烷或戊巴比妥钠麻醉，减少挣扎导致的损伤。

2）术后可给予布洛芬（5mg/kg）缓解疼痛，但需避免影响肿瘤微环境。

三、术后管理与监测

1. 日常观察

成瘤时间：通常7-14天可见肿块，定期卡尺测量长径（L）和短径（W），按公式（L×W²）/2计算体积。

2. 终点指标：

1）肿瘤直径＞1.5cm或体积＞2000mm³需终止实验（根据伦理指南调整）。

2）体重下降＞20%或出现溃疡、行动障碍时需人道处死。

3. 环境控制

1）保持SPF环境，单独饲养避免互相啃咬肿瘤。

2）提供高营养饲料和充足饮水，减少应激。

四、常见问题与解决

1. 不成瘤可能原因：

1）细胞活性差、接种量不足、免疫排斥（如未使用免疫缺陷鼠）。

2）肿瘤坏死：避免接种过深（进入肌肉层），或肿瘤过大导致血供不足。

五、数据记录与伦理

1. 详细记录：接种时间、细胞批次、肿瘤体积/形态、小鼠状态等。
2. 实验终点需符合动物福利标准，确保人道主义操作。